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近年来免疫抑制性受体在机体抗肿瘤免疫应答及肿瘤免疫治疗中的作用日益受到重视[1-2]。白细胞相关免疫球蛋白样受体1（leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor-1，LAIR-1）是一种最近发现的免疫抑制性受体，体外实验已证实LAIR-1能够强烈抑制多种免疫细胞的功能[3-6]，但国内外对于LAIR-1与实体肿瘤相关性的研究报道尚为少见。本研究拟对LAIR-1在宫颈癌患者淋巴细胞上的表达进行研究，以期探讨LAIR-1在抗肿瘤免疫应答和肿瘤免疫逃逸机制中的作用，为宫颈癌的诊断和治疗提供重要的理论和实验依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月～2020年11月九江市第三人民医院妇科收治的30例宫颈癌患者纳入宫颈癌组，另选取同期健康体检的30例志愿者纳入健康人组，年龄25～48岁，平均（42.13±5.26）岁。纳入标准：①宫颈癌患者均予通过液基薄层细胞学（TCT）和宫颈锥切术病检，且检查结果确诊为宫颈癌。排除标准：①近半年内使用过皮质类固醇及免疫抑制剂；②近28 d内发生感染，同时进行过抗病毒治疗；③伴重要脏器功能障碍；④处于妊娠期或哺乳期；⑤近3个月内使用过抗肿瘤药物。宫颈癌组中，年龄25～48岁，平均（30.12±5.23）岁；平均体重指数（BMI）（25.09±2.13）kg/m2；平均产次（1.36±0.03）次；不同临床分期/组织学分级：Ⅰ～Ⅱ期12例，Ⅲ～Ⅳ期10例，G1期5例，G3期3例。健康人组中，年龄26～45岁，平均（29.07±5.14）岁；平均BMI（24.69±2.08）kg/m2；平均产次（1.29±0.06）次。两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。参与者均已知情同意本研究，本研究经医院医学伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 血清标本采集宫颈癌组于治疗及术前采集血清，室温下静置半个小时，2000 r/min离心10 min，取上清液，置于-20℃冰箱备用。

1.2.2 转化生长因子-β对CD4+、CD8+、NK的刺激将宫颈癌组按照随机数字表法分为两个亚组（刺激组15例和非刺激组15例），每组3个复孔，刺激组加入试剂转化生长因子-β+聚酯-聚羟基脂肪酸（polyhydroxyalkanoates，PHA）；非刺激组无PHA、转化生长因子-β。其中转化生长因子-β的用量为20 μg/L，PHA为50 mg/L。

1.2.3 流式细胞术分析采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）：收集PBMC，用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤后，将细胞密度调整为4×106/mL，灭活兔血清封闭免疫球蛋白Fc受体（Fcrecepter，FcR），分别采用LAIR-1-PE、CD4-FITC、CD8-FITC、NK-FITmAb标记，并设同型对照抗体组。室温下避光孵育20 min，上机检测。调整散射光，即前向角散射（forwardscatter，FSC）和侧向角散射（sidescatter，SSC），在FSC-SSC散点图中圈出淋巴细胞，分析LAIR-1在T细胞亚群CD4+、CD8+、自然杀伤（NK）细胞中的表达水平。

1.3 观察指标

观察并分析LAIR-1在T细胞亚群CD4+、CD8+、NK细胞中的表达水平以及转化生长因子-β对宫颈癌患者CD4+、CD8+、NK细胞LAIR-1的刺激情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 25.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（

±s）表示，两组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 健康人组与宫颈癌组CD4+、CD8+T细胞和NK细胞LAIR-1分子表达水平的比较

宫颈癌组CD4+、CD8+T细胞和NK细胞LAIR-1分子表达水平高于健康人组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 健康人组与宫颈癌组CD4+、CD8+T细胞和NK细胞LAIR-1分子表达水平的比较（%，

±s）

2.2 转化生长因子-β对宫颈癌患者CD4+、CD8+、NK细胞LAIR-1刺激情况的比较

刺激组患者CD4+、CD8+、NK细胞中LAIR-1表达水平低于未刺激组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 转化生长因子-β对宫颈癌患者CD4+、CD8+、NK细胞LAIR-1刺激情况的比较（%，

±s）

3 讨论

宫颈癌是女性生殖器官常见的肿瘤之一，对妇女生命造成严重威胁。而人乳头状瘤病毒（HPV）感染可以导致宫颈癌，其调节蛋白持续表达于宫颈癌细胞，具有免疫原性。因此宫颈癌患者的抗肿瘤免疫应答已成为国内外相关学者研究的热点。其中TIL作为一个特殊的异质性群体，受到特别的关注。研究发现宫颈癌TIL主要包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞（Tregs）和极少量的B细胞和NK细胞。CD4+T细胞、CD8+T细胞主要分布于肿瘤周围或其间质中，癌巢内其阳性细胞明显低于间质内。而且，新鲜提取的TIL抗瘤活性十分低下[7]。提示肿瘤的局部微环境抑制机体的细胞免疫功能。另外，宫颈癌肿瘤细胞还可以通过多种机制逃逸免疫细胞杀伤，如低水平表达MHC分子逃避CD8+CTL的识别和杀伤、高表达FasL介导肿瘤浸润淋巴细胞的调亡、释放抑制性细胞因子抑制免疫细胞的功能等[8]。

近年来，免疫抑制性受体在肿瘤免疫治疗中的作用日益受到重视。已发现表达于活化T细胞上的抑制性受体CTLA-4（CD152）和PD-1在肿瘤免疫应答中发挥重要作用。阻断它们与其配体的结合，能够增强T细胞的活化，促进对肿瘤的清除[9-10]。此外还发现C-型凝集素家族的免疫抑制性NK细胞受体CD94/NKG2A在宫颈癌肿瘤浸润的CD8+T细胞上的表达上调，并且抑制CD8+T细胞的杀伤功能[11]。因此推测CD94/NKG2A表达的提高可能与肿瘤的免疫逃逸机制有关。

LAIR-1是一种最近发现的免疫抑制性受体，属于免疫球蛋白超家族，2004年获得CD编号（CD305）。LAIR-1胞浆区含有两个ITIM基序，能募集含有SH2的酪氨酸磷酸酶1（SHP-1），发挥抑制功能。LAIR-1表达于包括NK细胞、T细胞等多种白细胞，并强烈抑制上述细胞的功能[12]。相关研究证明胶原分子是LAIR-1的高亲和力配体，并且在某些肿瘤组织中表达异常[13]。

LAIR-1能抑制由特异性抗原或CD3刺激引起的CD4+T细胞的增殖，并且下调白介素-2（IL-2）和γ-干扰素（IFN-γ）的产生，同时诱导转化生长因子-β的分泌。而且LAIR-1的表达水平直接影响其对由CD3介导的CD8+和CD4+T细胞活化的调节能力。IFN-γ在机体抗肿瘤免疫应答过程中发挥重要作用。IFN-γ可通过上调靶细胞表面MHC-I类分子，增强CTL细胞对肿瘤的识别和杀伤作用，也可直接激活NK细胞，增强其抗肿瘤作用；转化生长因子-β则可通过抑制T、B细胞的增殖，抑制NK细胞和CTL细胞的杀伤活性等机制抑制机体的抗肿瘤免疫应答。而转化生长因子-β与TIL无细胞毒活性显著相关[14]。因此提示LAIR-1可能参与机体的肿瘤免疫应答。

目前虽已证实LAIR-1可抑制人粒单系白血病细胞系的增殖并诱导其凋亡，并且发现LAIR-1表达水平与慢性B细胞性白血病的发病程度有关[15]，但国内外罕见LAIR-1与实体肿瘤疾病相关性的免疫学研究报道。

本研究对LAIR-1在宫颈癌患者外周血中表达水平进行观察，发现患者外周血中的NK细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞上LAIR-1的表达阳性率高于健康人，提示该分子可能参与机体肿瘤免疫应答。

目前对LAIR-1与宫颈癌免疫逃逸相关性的研究在国内外还鲜为少见。本研究中笔者用流式细胞学等多种试验方法研究LAIR-1在宫颈癌患者淋巴细胞中的表达，探讨LAIR-1在抗肿瘤免疫应答中的作用，为宫颈癌的诊断和治疗提供重要的理论和实验依据，研究结果将有望为肿瘤疾病的诊断和治疗提供重要的理论依据和手段。

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