张家界地区土家族人群Citrin蛋白缺陷所致新生儿肝内胆汁淤积症的基因分析及生化指标特点
张 伟 田昌军▲ 汪宏波 刘芳平 覃大卫
湖南省张家界市人民医院新生儿科，湖南张家界 427000
[摘要]目的 探讨张家界地区土家族人群中Citrin蛋白缺陷所致新生儿肝内胆汁淤积症（NICCD）的SLC25A13基因突变类型及生化特点。方法选取2014年9月～2016年12月张家界市人民医院儿科收治的特发性胆汁淤积症（INC）患儿进行SLC25A13基因突变分析；确诊NICCD为观察组，随机选取除外NICCD的胆汁淤积症患儿为对照组，比较两组生化指标的差异。结果 85例患儿行SLC25A13基因突变分析，确诊NICCD者7例，检出SLC25A13基因突变3种，分别为1851del4、IVS6+5G＞A、1638ins23突变，其中1851del4突变占全部突变数量的57.10%。观察组胆汁酸（TBA）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、凝血酶原时间（PT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）/丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平高于对照组，ALT、AST、清蛋白（Alb）、血糖（BS）水平低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论SLC25A13基因突变所致NICCD是张家界地区土家族人群特发性胆汁淤积症的重要病因之一，以1851del4突变型最常见；NICCD患儿生化指标改变有助于早期识别疾病。
[关键词]张家界地区；土家族；新生儿肝内胆汁淤积症；SLC25A13基因突变
[中图分类号]R722.1
[文献标识码]A
[文章编号]1674-4721（2018）8（a）-0045-03
[基金项目]湖南省张家界市科技计划重点项目（2015JB1128）
▲通讯作者
Genetic analysis and biochemical index characteristics of neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin protein deficiency in Tujia minority in Zhangjiajie Area
ZHANG WeiTIAN Chang-jun▲ WANG Hong-bo LIU Fang-ping QIN Da-wei
Department of Neonatology,Zhangjiajie People′s Hospital,Hu′nan Province,Zhangjiajie 427000,China
Department of Neonatology,Zhangjiajie People′s Hospital,Hu′nan Province,Zhangjiajie 427000,China
[Abstract]Objective To investigate the mutation and biochemical characteristics of SLC25A13 gene in neonatal intrahepatic cholestasis caused by Citrin protein deficiency (NICCD)in Tujia minority in Zhangjiajie Area.Methods SLC25A13 gene mutation analysis was performed in children with idiopathic neonatal cholestasis(INC)admitted to the Department of Pediatrics in our Hospital from September 2014 to December 2016.The patients diagnosed with NICCD were classified into observation group.Pediatric patients randomly selected except for NICCD were assigned to control group.The differences in biochemical indicators between the two groups were compared.Results Among 85 pediatric patients performed with SLC25A13 gene mutation analysis,7 cases were diagnosed as NICCD.The SLC25A13 gene mutated for three mutations including 1851del4,IVS6+5G＞A,and 1638ins23,of which the 1851del4 mutation accounted for 57.10%of the total mutations.The comparison of biochemical indicators showed that the total bile acid,gammaglutamyl transpeptidase,prothrombin time,and aspartate aminotransferase/alanine aminotransferase (AST/ALT)were higher in the observation group than in the control group,and the levels of ALT,AST,serum albumin,and BS were lower in the observation group than in the control group(P＜0.05）.Conclusion NICCD due to SLC25A13 gene mutation is one of the main causes for INC in Tujia minority in Zhangjiajie Area.The 1851del4 mutant is the most common type.Changes in biochemical markers in NICCD children are helpful for early identification of the disease.
[Key words]Zhangjiajie Area;Tujia minority;NICCD;SLC25A13 gene mutation
Citrin是由位于染色体7q21.3的基因SLC25A13编码而成的蛋白质，在合成尿素、蛋白质、核苷酸糖的过程中具有相当的生理功能。Citrin缺陷病是SLC25A13基因突变所致常染色体隐性遗传性疾病，其表型之一是Citrin蛋白缺陷所致新生儿肝内胆汁淤积症（neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency，NICCD），临床表现主要为黄疸消退延迟、胆汁淤积、肝功能异常、高氨基酸血症等[1]。近年来国内多地均有相关病例报道，是我国儿童特发性胆汁淤积症最重要的病因之一[2-4]。目前研究报道SLC25A13基因携带者在不同地域及人种间有显著差异，两广、香港、湖南发病明显高于其他省份[5]。为探讨张家界地区土家族人群NICCD患儿的SLC25A13基因突变类型，本研究对85例特发性胆汁淤积症患儿进行SLC25A13基因突变分析，其中确诊NICCD者7例，现将研究内容报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2014年9月～2016年12月我院新生儿科收治的特发性胆汁淤积症（idiopathic neonatal choholestasis，INC）85例，经SLC25A13基因突变分析确诊NICCD7例为观察组，随机选择同期未检出明确病因的INC患儿14例为对照组。INC定义为：1岁以内起病，总胆红素超过85 mmol/L，直接胆红素比例＞20%或总胆红素＜85 mmol/L时直接胆红素＞17 mmol/L，病因不明。胆汁淤积症的病因检测包括：病毒抗体检测（HBV抗体、HCV抗体、TORCH病毒抗体、梅毒螺旋体抗体），感染（血常规、hs-CRP、血培养），肝胆超声，血串联质谱及尿有机酸分析。确诊NICCD者7例，男占比42.9%；出生体重 2.35～3.91 kg，平均（2.91±0.41） kg；黄疸起病年龄 4～45 d，平均（11.43±6.50） d；初诊时年龄4～94 d，平均（23.57±21.64） d；纯母乳喂养 2 例（28.6%）。对照组 14 例，男 42.9%；平均出生体重（3.07±0.34） kg；黄疸起病平均年龄（12.86±7.80）d；初诊时平均年龄（22.93±20.61）d；纯母乳喂养比例35.7%。两组患儿性别、年龄、出生体重、起病年龄等比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。
1.2 DNA提取及SLC25A13基因诊断
抽取静脉抗凝血2 ml送金域公司，对SLC25A13基因外显子进行扩增，精制纯化后测序。测序结果与Genbank 中 SLC25A13 基因（NG_000007.13）标准序列比对。基因分析2条等位基因均检测出致病性SLC25A13突变的确诊为NICCD；仅有1条等位基因致病性突变或不能明确的突变被认为是疑诊NICCD；没有致病性突变或不能检测出突变的为非NICCD。
1.3 生化指标
患儿于清晨进食前抽取静脉血，采用Hitachi7600全自动生化分析仪，检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、胆汁酸（TBA）、清蛋白（Alb）、血糖（BS）、凝血酶原时间（PT）、总胆红素（TBil）、直接胆红素（DBil）。
1.4 统计学方法
采用SPSS 19.0统计软件分析，计量资料以均数±标准差（.jpg "pagenumber_ebook=52,pagenumber_book=46")
±s）表示，采用 t检验；计数资料以率表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
±s）表示，采用 t检验；计数资料以率表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果
2.1 SLC25A13基因突变分析
85例INC患儿经SLC25A13基因突变分析确诊NICCD 7例，疑似NICCD 1例。检测出基因突变型3种：1851del4、IVS6+5G＞A、1638ins23 突变，分别为Ⅰ/Ⅰ3例，Ⅰ/Ⅹ1 例，Ⅰ/Ⅲ1 例，Ⅲ/Ⅹ2 例；疑似 NICCD 者SLC25A13基因突变类型为Ⅰ/－，结果显示1851del4是最常见的突变类型（表1）。
表1 13例NICCD患儿SLC25A13基因突变类型
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2.2 两组生化指标的比较
观察组 TBA、GGT、PT、AST/ALT 高于对照组，AST、ALT、Alb、BS低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；观察组 TBil、DBil低于对照组，差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。
表2 两组患儿生化指标的比较（.jpg "pagenumber_ebook=52,pagenumber_book=46")
±s）
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3 讨论
Citrin缺乏症最初由日本学者报道，随后在亚洲多国及欧美均有报道[4，6-7]，该疾病具有种族及地域差异，以亚洲多发[8]。报道显示我国长江以北SLC25A13基因携带者约为1/940，长江以南为1/48[9-10]。张家界地区地处长江以南，属NICCD高发地区，本研究85例INC检出NICCD患儿7例，发病率高达8.23%，与两广地区报道数据相近[3，8]。
基因库资料显示SLC25A13基因突序列变异80余种。日本报道最常见的突变型是IVS11+1G＞A（39%）[11-12]。国内报道均显示1851del4为最常见的突变型，其次以 c.1638ins23、c.IVS6+5G＞A 和IVS16ins3kb三种较为常见[3，13-14]。国内文献均为汉族人群资料，尚无任何少数民族人群NICCD患儿的基因突变型的报道，本研究显示张家界地区土家族人群中罹患NICCD者，其基因突变类型亦以1851del4最常见，其次尚见IVS16ins3kb、IVS6+5G＞A 突变。
基因检测成本较大，难以对有疑诊患儿采用SLC25A13基因突变分析。因此对比NICCD患儿与INC患儿的生化指标差异，对早期识别NICCD具有参考意义。Citrin蛋白的主要功能是将线粒体内的天冬氨酸转运至细胞质内，参与尿素循环，为合成核苷酸及蛋白质提供材料，同时将胞质内的谷氨酸转运至线粒体，参与调节还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）比例，维持胞质中氧化/还原状态的稳定性[5，9]。当Citrin蛋白缺乏时，尿素循环通路受阻，合成蛋白质及核苷酸过程受抑制，而致低蛋白血症、瓜氨酸大量蓄积及高氨血症，同时因苹果酸穿梭受累，胞浆中NADH被重新氧化为NAD+，而导致脂肪酸和脂肪合成增加，同时抑制糖酵解及糖异生过程，致ATP合成不足而出现低血糖症及高乳酸血症[13]。本研究结果与之前类似报道相符[15-17]。
本研究结果显示，SLC25A13基因突变所致Citrin蛋白缺陷是张家界地区土家族人群INC的重要原因之一，SLC25A13基因的突变热点与国内报道一致，以1851del4型最为常见。NICCD患儿生化指标的特点有助于早期识别疾病。
[参考文献]
[1]Saheki T，Kobayashi K.Mitochondrial aspartate glutamate carrier（citrin）deficiency as the cause of adult-onset type Ⅱcitrullinemia（CTLN2）andidiopathicneonatalhepatitis（NICCD）[J].J Hum Genet，2002，47（7）：333-341.
[2]邱文娟，叶军，韩连书，等.Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症12例临床和实验室研究[J].临床儿科杂志，2007，25（12）：983-987.
[3]伍秋频，王琳琳，陈秀奇，等.广西婴儿特发性肝内胆汁淤积SLC25A13基因突变的筛查[J].世界华人消化杂志，2013，21（12）：1120-1125.
[4]郭红梅，郑毕霞，李玫.南京地区21例SLC25A13基因突变所致Citrin蛋白缺陷引发新生儿肝内胆汁淤积症临床分析[J].临床肝胆病杂志，2014，30（11）：1127-1131.
[5]鲁耀邦，彭菲，李孟贤，等.希特林蛋白缺乏症的研究进展及展望[J].中华医学遗传学杂志，2006，23（6）：655-658.
[6]Ngu HL，Zabedah MY，Kobayashi K.Neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency（NICCD） in three Malay children[J].Malays J Pathol，2010，32（1）：53-57.
[7]Fiermonte G，Parisi G，Martinelli D，et al.A new Caucasian case of neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency（NICCD）： a clinical，molecular，and functional study[J].Mol Genet Metab，2011，104（4）：501-506.
[8]林伟霞.我国儿科希特林缺陷病患者分子诊断研究：SLC25A13基因突变谱及其地理分布[D].广州：暨南大学，2017.
[9]董永绥.婴儿胆汁淤积性肝病研究进展及展望[J].中国实用儿科杂志，2013，28（4）：241-245.
[10]Lu B，Kobayashi K，Ushikai M，et al.Frequency and distribution in East Asia of 12 mutations identified in the SLC2 5 A1 3 gene of Japanese patients with citrin deficiency[J].J Hum Gent，2005，50（7）：338-346.
[11]宋元宗，小林圭子.Citrin缺陷病[J].中华实用儿科临床杂志，2008，23（20）：1564-1565.
[12]温鹏强，王国兵，陈占玲，等.Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症SLC25A13基因分析[J].中国当代儿科杂志，2011，13（4）：303-308.
[13]唐莲，李双杰，姜涛，等.希特林蛋白缺陷所致肝内胆汁淤积症患儿的相关基因与其生化指标的变化[J].中国妇幼保健，2017，32（5）：1013-1015.
[14]尹利芳，温鹏强，刘晓红，等.Citrin缺陷致新生儿肝内胆汁淤积症患儿生化改变研究[J].中国优生与遗传杂志，2012，20（2）：79-81.
[15]白欣立，王小康，杨亭亭，等.希特林缺陷致新生儿肝内胆汁淤积症患儿血生化及预后观察[J].河北医药，2017，39（19）：2980-2982.
[16]Wang JS，Wang XH，Zheng YJ，et al.Biochemical characteristics of neonatal cholestasis induced by citrin deficiency[J].World J Gastroentero，2012，18（39）：5601-5607.
（收稿日期：2018-03-14 本文编辑：崔建中）