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流行病学资料显示，全球的宫颈癌的发病率和死亡率处于较高水平，给患者家庭和社会带来沉重的经济压力和精神负担[1-2]。研究证实，高危型人乳头瘤病毒（HPV）持续感染与宫颈癌有一定的相关性[3]，其病毒载量和阳性率越高，宫颈癌发生的机会越大[4]。宫颈癌早期诊断的关键是寻找早期筛查与预测宫颈癌前病变的有效方法。宫颈早期浸润癌大多无症状、通常在体检中发现。P16是分子生物事件中一种重要的抑癌基因，其在宫颈中过度表达与宫颈癌前病变关系密切；而Ki-67可作为评估肿瘤治疗及预后的分子靶标。本研究通过免疫组化技术检测P16与Ki-67在宫颈癌前病变的表达，探讨其在宫颈癌前病变的作用，并检测高危HPV感染，期望为宫颈癌前病变与宫颈癌的早期诊断和治疗提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

所有病例均来自河源市人民医院2015年1月～2017年12月手术标本，共75例。按病理结果分类，低度上皮内瘤变（CINⅠ）18例，高度上皮内瘤变（CINⅡ和CINⅢ）57例。选30例宫颈正常组织作对照组。

1.2 方法

用免疫组化方法检测30例宫颈正常组织，18例宫颈低度上皮内瘤变（CINⅠ），57例高度上皮内瘤变（CINⅡ和CINⅢ），并用聚合酶链反应（PCR）法检测高危型HPV-DNA的类型，可检测出13种HPV高危亚型。应用第二代杂交捕获技术（美国Digene公司）进行HPV-DNA检测，标本的荧光度值（RLU）与阳性定标的阈值（CO）的比值（RLU/CO）表示，RLU/CO值≥1.0 pg/ml则为高危HPV-DNA阳性。

1.3 结果判断

根据安必平公司产品说明和相关文献，p53阳性表达为胞核着色，无棕黄色颗粒者为（-），如显示棕黄色颗粒，则用（+）表示，如为棕黄色粗颗粒，则用（++）表示，如显示棕褐色粗颗粒，则表示为（+++）。

1.4 统计学方法

使用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（

±s）表示，采用 t检验；计数资料以率表示，采用χ2检验，采用Perason相关性检测计算相关性，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 P16和Ki-67蛋白在宫颈活检组织中的检测结果

P16和Ki-67蛋白在宫颈活检组织中的检测结果如下（表1）：P16蛋白在宫颈CINⅠ级和CINⅡ～Ⅲ级的阳性表达率分别为77.80%、100.00%，宫颈级别越高，其表达越强，不同组别间表达差异有显著性（P＜0.01）。 Ki-67 蛋白表达也呈递增趋势（P＜0.01），表达强度也随着CIN级别增加而增强，蛋白阳性表达率均高于对照组。

表1 P16和Ki-67在宫颈活检组织中表达情况的比较[n（%）]

与宫颈正常组织组比较，*P＜0.05，与CINⅠ组比较，#P＜0.05

2.2 高危HPV感染在宫颈组织中的表达

高危HPV感染在宫颈癌前病变组织中的阳性表达率为66.5%，而高危型HPV16/18的阳性表达率则为54.3%，且宫颈病变级别越高，其表达越强。结果显示，CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ患者的高危HPV-DNA阳性率分别为66.70%，84.60%、90.30%，各组差别有统计学意义与宫颈病变程度成正相关（r=0.887，P＜0.05）（表 2）。

表2 高危HPV感染在宫颈活检组织中的表达情况分析（n）

与宫颈正常组织比较，*P＜0.05

2.3 宫颈病变组织中高危HPV感染与P16、Ki-67蛋白的关系

高危型HPV感染随着P16和Ki-67蛋白表达增高，高危HPV感染也相应增高，且以HPV16为主，差异有统计学意义（P＜0.05）（表 3）。

表3 高危HPV感染与P16、Ki-67蛋白的关系[n（%）]

与宫颈正常组织组比较，*P＜0.05

3 讨论

宫颈癌是常见的恶性肿瘤，发达国家研究显示，宫颈癌的发病率和病死率明显下降，但我国为发展中国家，宫颈癌还面临诸多挑战，且近来患者有年轻化的趋势，尽早发现宫颈早期病变，并采取及时的治疗是提高患者生活质量的重要方法[5]。HPV具有双股DNA链，可引起黏膜的鳞状上皮异常增殖[6-7]。现在提倡精准医学，通过更加精确的CIN分级与宫颈癌前病变的早期诊断，希望可降低宫颈癌的发生率。本研究结果显示，高危HPV感染在宫颈病变组织中的感染率为66.5%，随着CIN级别的升高，HPV-DNA相对含量也随之表达增强，提示宫颈癌及癌前病变的发生发展与高危型HPV感染有密切的关系。

本研究结果显示，宫颈上皮内低度瘤变（CINⅠ）中，P16阳性率为77.8%，Ki-67阳性率为65.8%，高于宫颈正常组织，差异有统计学意义（P＜0.05）；宫颈上皮内高度瘤变（CINⅡ～Ⅲ）中，P16和Ki-67阳性率为100.00%、94.70%，高于CINⅠ，差异有统计学意义（P＜0.05）。高危型HPV在宫颈正常组织、CINⅠ和C1NⅡ～Ⅲ病变组感染者分别为6.70%、66.70%，84.60%和90.30%，宫颈癌前病变组织明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。因此，高危型HPV感染及P16、Ki-67与宫颈癌前病变发生发展相关，联合应用可作为CIN分级诊断的辅助方法。

研究表明，P16基因是近来发现的又一重要的抑癌蛋白，与人类肿瘤关系密切，可作为有效的诊断标志物而区分出宫颈正常组织和上皮内瘤变组织。本研究结果显示，P16蛋白随着CIN级别升高，其表达强度亦相应增加，且表现出明显的分层现象，这与COX等[8]的结论类似。Ki-67是一种细胞增殖核抗原，在细胞周期的G1、S、G2和M期表达，在静止期为阴性[9-11]。对肿瘤的分期、转移及预后判断等有一定价值[12-13]。本研究结果显示，Ki-67基因在对照组中不表达，在高级别宫颈上皮内瘤变组织中的表达显著高于低级别宫颈上皮内病变组织，有望成为评估预后的一个指标[14-15]。

综上所述，高危型HPV持续感染是诱发宫颈癌前病变的重要原因，高危HPV感染和P16、Ki-67的共同表达在宫颈癌前病变中有重要的作用。联合检测P16和Ki-67的表达避免过度治疗，简便易行，可为临床治疗提供更加明确的分子病理诊断依据，可有效提高宫颈早期病变的检出率，降低误诊及漏诊率。

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