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壮药藤苦参（Streptocaulon griffithii Hook.f.）为萝摩科（Asclepiadaceace）植物马莲鞍的干燥根，分布于广西、云南、印度、越南、缅甸、老挝、柬埔寨和马来西亚等地，别名古羊藤、老鸦咀、毛青才、南苦参、奶藤、马达、红马连鞍、虎阴藤、老鸦嘴，其木质根被用于治疗感冒发热、肠炎、痢疾、胃痛、跌打肿痛、毒蛇咬伤等症。藤苦参属广西特色、大宗、壮瑶药材，为部颁标准民族医药产品及知名壮成药外感风痧颗粒（片）的主方药，是傣药经方雅叫哈顿散中的主治药之一。张琳等[6]报道从藤苦参根乙醇提取物中分离出19个化合物，其中9个为三萜皂苷元，8个为强心苷类成分，还有其他成分。这19个化合物为：α-香树脂醇乙酸酯、羽扇豆醇乙酸酯、11-乙氧基-3-乙酰基-12-乌苏烯-3-醇、11-酮-α-香树脂醇乙酸酯、α-香树脂醇、羽扇豆醇、24-亚甲基环木波罗烷醇、环木菠罗-23-烯-3β，25-二醇、β-古甾醇、杠柳苷元洋地黄毒糖苷、藤苦参毒苷元、环木波罗烷-3，24，25-三醇、烟酸、洋地黄毒苷元、16-O-乙酰基羟基洋地黄毒苷元、杠柳苷元、16-O-乙酰基羟基杠柳苷元、杠柳苷元葡萄糖苷、藤苦参毒苷A。栾连军等[1-8]的研究提示，藤苦参素（16-O-acetglgitoxgenin）在体外可诱导肿瘤细胞凋亡，具有较好的抗肿瘤活性。藤苦参素属于强心苷类化合物，因此，本研究建立测量藤苦参中强心苷的含量方法，并对比广西不同产地及采收季节的藤苦参中的强心苷含量，以期为藤苦参的规范化种植及质量控制提供理论依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

分析天平（ME104E）、725型紫外可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），HH-S4数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂），超声清洗仪（上海冠特超声仪器有限公司SG250HE型）。

1.2 试剂及样品

含量测定方法研究所用藤苦参样品购买于南宁市景昌中药饮片有限公司，生产批号为20160401。地高辛对照品购买于中国药品生物制品检定所，生产批号为100015～200709。所用试剂均为分析纯。

广西不同产地及采收季节的藤苦参样品为实地采挖，净制，切段，干燥，经广西中医药大学制药厂质量保证部鉴定，符合《广西壮族自治区壮药材质量标准汇编》（第1卷）藤苦参标准[10]，为萝藦科植物马连鞍 Streptocaulon juventas （Lour.） Merr.的干燥根

2 实验方法与结果[11-18]

2.1 藤苦参强心苷含量测定方法研究

2.1.1 对照品溶液的制备

精密称取地高辛对照品10 mg，置于25 ml容量瓶中用60%乙醇溶解后定容至刻度制成标准溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备

精密称取藤苦参粗粉2 g，置于100 ml锥形瓶，加入70%乙醇40 ml，超声提取2次，每次40 min，提取后补重，过滤合并滤液，挥干溶剂，加入60%乙醇溶解，定容至50 ml，再从50 ml容量瓶中取5 ml样品溶液，放入25 ml容量瓶中，稀释至刻度即得供试品溶液。

2.1.3 测定波长的选择

分别精密量取上述对照品溶液、供试品溶液1 ml置于具塞试管中，加入碱性苦味酸溶液（A液：2%苦味酸溶液，B 液：15%NaOH，使用前按 A∶B=90∶10 混合）4 ml，摇匀，室温下放置20 min，以不加样品溶液同法操作下的碱性苦味酸溶液为空白，进行光谱扫描，结果见图1，提示最大吸收波长为415 nm，故选择测定波长为415 nm。

图1 对照品及供试品UV光谱图

1.供试品溶液 2.对照品溶液

2.1.4 方法学考查

2.1.4.1 线性关系用移液管移取标准液 0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，分别置于具塞试管中，加入 60%乙醇稀释至1 ml，分别加入碱性苦味酸溶液（A液：2%苦味酸溶液，B 液：15%NaOH，使用前按 A∶B=90∶10 混合）4 ml，摇匀，室温放置20 min，在波长415 nm测吸光度。以吸光度A纵坐标，浓度C为横坐标，作标准曲线。结果得回归方程y=14.968x+0.008，r=0.9969，标准曲线见图2。

图2 标准曲线图

2.1.4.2精密度实验精密量取对照品溶液0.5 ml，稀释至1 ml，加入碱性苦味酸溶液（A液：2%苦味酸溶液，B液：15%NaOH，使用前按 A∶B=90∶10 混合）4 ml，摇匀，显色20 min，在波长415 nm，重复测定6次A值，结果见表1，吸光度的RSD为0.1%，提示仪器精密度良好。

表1 精密度试验结果

2.1.4.3 稳定性实验精密量取样品溶液1 ml，加入碱性苦味酸溶液（A液：2%苦味酸溶液，B液：15%NaOH，使用前按 A∶B=90∶10 混合）4 ml，摇匀，显色 20 min，在波长415 nm，每隔10 min测定一次吸光度。吸光度的RSD为3.29%，提示显色后室温放置20～40 min内，其吸光度较稳定，结果见表2。

表2 稳定性试验结果

2.1.4.4 重复性实验精密量取6份样品溶液1 ml，加入碱性苦味酸溶液（A液：2%苦味酸溶液，B液：15%NaOH，使用前按 A∶B=90∶10 混合）4 ml，摇匀，放置20 min，在波长415 nm下测定吸光度。结果吸光度的RSD为2.4%（表3），提示此方法的重复性良好。

表3 重复性试验结果

2.1.4.5 加样回收实验精密量取已知含量的藤苦参样品5份，分别加入一定量的地高辛对照品，加入碱性苦味酸溶液（A液：2%苦味酸溶液，B液：15%NaOH，使用前按 A∶B=90∶10 混合）4 ml，摇匀，放置 20 min，在波长415 nm测吸光度，计算回收率，平均回收率为95.51%，RSD 为 2.16%（表4）。

表4 加样回收实验结果

2.1.4.6 含量的测定用移液管精密移取样品溶液1.0 ml，置于具塞试管中，加入碱性苦味酸溶液（A液：2%苦味酸溶液，B 液：15%NaOH，使用前按 A∶B=90∶10 混合）4 ml，摇匀，室温下放置20 min，在波长 415 nm测吸光度，计算强心苷的含量，结果见表5。

表5 6批样品强心苷含量分析

2.2 广西4个不同地区及采收季节的藤苦参中强心苷含量测定

分别在广西4个藤苦参主产区、不同采收季节（月份）实地采挖藤苦参药材，净制，切段，干燥后，按“2.1”含量测定方法测定藤苦参中强心苷的含量，每个产地每个采收季节测定3个样品，计算平均含量，结果见表6。

表6 不同产地、采收季节藤苦参中强心苷含量测定

3 讨论

强心苷是生物界中存在的一类对心脏具有强心作用等显著生理活性的甾体苷类，主要分布于夹竹桃科、玄参科、百合科、萝藦科、十字花科、毛茛科、卫矛科、桑科等植物中。强心苷一般可溶于水、醇、丙酮等极性溶剂，微溶于乙酸乙酯、含醇氯仿，几乎不溶于乙醚、苯、石油醚等极性小的溶剂[19]。经过预实验发现，藤苦参醇提比水效果好，醇提中用70%～80%乙醇作溶剂，提取效果最好。在提取方法上笔者考察了回流提取和超声提取，结果两方法提取的检测结果相差不大，在强心苷的含量检测上以地高辛为对照品，采用碱性苦味酸试剂（Baljet反应）于甲型强心苷α，β-不饱和内酯环的显色反应对强心苷成分含量进行测定。

不同产地、不同采收季节藤苦参中强心苷的含量测定结果显示，广西4个主产地南宁、钦州、百色、上思的藤苦参强心苷的含量区别较大，其中钦州八塞沟的藤苦参强心苷的含量最高。通过比较采收时间，发现10～12月采收的藤苦参强心苷的含量普遍高于其他采收时间，而1～3月采收的藤苦参强心苷的含量最低。以上结果提示藤苦参的品质受产地、采收季节的影响，进行药材的规范化种植时，可考虑选择强心苷含量较高产地的种质资源进行栽培，采收药材时充分考虑采收时间对药材质量的影响。另外，藤苦参根、茎、叶中强心苷含量的比较以及强心苷含量随植物生产年限的富集规律，施肥对藤苦参有效成分的影响等研究工作还有待进一步的加强。

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