施华球谢瑞莲

赣南医学院第一附属医院肿瘤科，江西 赣州 341000

[摘要]目的探讨三阴性乳腺癌中Lin28B的表达情况及其临床意义。方法选取2008年1月～2013年12月我院收治的三阴性乳腺癌96例患者为观察对象，采用免疫组织化学方法检测癌组织和癌旁组织中Lin28B蛋白的表达，分析Lin28B蛋白表达与三阴性乳腺癌患者病理特征的相关性。结果癌组织Lin28B的阳性率为70.8%，在癌旁组织Lin28B的阳性率为29.2%，两者的阳性率差异有统计学意义（P<0.05）；Lin28B蛋白表达与三阴性乳腺癌患者的年龄、肿瘤分期和月经状态无关（P>0.05），但与患者的肿瘤分化程度、远处转移、淋巴结转移、Ki67表达成正相关（P<0.05）。结论Lin28B的表达与三阴性乳腺癌的发生、发展有关，可能影响病情的发展和患者的预后。

[关键词]三阴性乳腺癌；Lin28B；临床意义

三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）是指雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progestrone receptor，PR）[1]和原癌基因Her-2均表现为阴性的乳腺癌，占乳腺癌患者总数的12%～17%[2]。TNBC主要病理表现为组织学分级高、组织分化程度低，故其预后差、临床复发率高、转移率高、死亡率高；另外，由于TNBC患者体内缺少ER、PR、Her-2靶点，因此其对靶向治疗不敏感，效果并不好[3-4]。本文重点研究Lin28B在三阴性乳腺癌中的表达，并探讨其临床意义。

选取2008年1月～2013年12月我院收治并诊断为三阴性乳腺癌的96例患者作为观察对象，均为女性，年龄31～56岁，平均（48.1±7.95）岁。TNBC的评价标准：ER（-）、PR（-）和Her-2（-）。ER和PR进行细胞核染色，免疫组织化学染色阳性细胞在10%以上者为阳性。Her-2免疫组织化学染色“-”或“+”为阴性，“+++”为阳性，“++”用色素原位杂交法（chromogen in situ hybridization，CISH）验证。ER、PR和Her-2均阴性即定义为三阴乳腺癌，有任何一个阳性者即定义为非三阴乳腺癌。术前均未经放疗、化疗和免疫疗法。

1.2癌组织中Lin28B蛋白检测

采用免疫组织化学方法检测癌组织和癌旁组织中Lin28B蛋白的表达[5]。鼠抗人Lin28B单克隆一抗从Abcam公司（ab71415）购买，工作浓度1∶50，磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffer solution，PBS）代替一抗稀释液作为阴性对照，具体染色实验步骤依据试剂盒进行[6]。癌组织和癌旁组织每组4张切片，每张切片采用高倍显微镜选取5个视野进行计数，每个视野分别对100个肿瘤细胞进行计数。以阳性细胞染色深度作为评定标准，并计算阳性染色率。细胞膜或者细胞浆中出现棕黄色或者黄色的颗粒为阳性染色，当阳性染色细胞数/总细胞数≤10%时，为阴性表达（-），阳性细胞数/总细胞数>10%。

组织分化程度分为Ⅰ级（高分化，G1）、Ⅱ级（中分化，G2）、Ⅲ级（低分化，G3），分级愈高，恶性程度愈高。肿瘤分期基于原发肿瘤的大小，T1：＜2 cm；T2：2～5 cm；T3：＞5 cm；T4：肿瘤存在浸润，如侵犯皮肤、胸腔。Ki67用免疫组织化学染色法检测，检测过程和结果判定按照Ki67检测抗体（购自ABCA公司）说明书进行。阳性标准为细胞核内棕黄色颗粒，阳性细胞数＜5%为阴性，＞5%为阳性。

数据采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计量资料用±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，Lin28B蛋白表达与三阴性乳腺癌患者病理特征相关性采用Spearman相关性分析方法，以P<0.05为差异有统计学意义。

在癌组织中Lin28B的阳性例数为68例（70.8%），阴性例数为28例（29.2%）；癌旁组织中Lin28B的阳性例数为17例（17.7%），阴性例数为79例（82.3%）。癌组织和癌旁组织中Lin28B表达的阳性率差异有统计学意义（P<0.05）。

Lin28B蛋白表达与三阴性乳腺癌患者的年龄、肿瘤分期和月经状态之间无关（P>0.05）；Lin28B蛋白表达与三阴性乳腺癌患者的肿瘤分化程度、远处转移、淋巴结转移、Ki67表达均成正相关（P<0.05）（表1）。

近年来研究发现，Lin28B与癌症的发生紧密相关，其在发育中的组织以及胚胎干细胞中的表达较高，伴随着体内细胞的生长分化成熟，其表达量逐渐降低，最后直至消失。研究表明，在人类的肿瘤中Lin28B蛋白过表达情况比较多见，其表达异常较常见于肠癌、肝癌以及乳腺癌等疾病[8-9]。

目前的研究认为，Lin28B蛋白通过抑制let-7 microRNA来发挥促进肿瘤增殖的功能。let-7家族通过作用于Lin28B、c-myc、K-RAS等原癌基因和cyclinD1/2等细胞周期蛋白抑制肿瘤增殖，促进肿瘤细胞凋亡。161例食管癌患者中关于let-7和Lin28B的研究表明，食管癌细胞中Lin28B的表达明显高于非癌性细胞，对于肿瘤浸润生长的区域其表达量更高[10-12]；食管癌患者生存预后差、淋巴结转移等与Lin28B高表达具有相关性，let-7低表达也与Lin28B有关；多因素研究表明在食管癌中Lin28B是一种独立预后因子；体内试验表明，Lin28B特异性敲除后能够降低癌细胞的侵袭以及转移能力[13]。Lin28B蛋白能够加速食管癌的进展，导致不良预后，而通过抑制Lin28B蛋白表达能够降低食管癌细胞的侵袭和增殖能力，抑制癌细胞的生长。

本研究结果显示，癌组织中Lin28B的表达高于癌旁组织（P＜0.05），且Lin28B蛋白表达与患者的肿瘤分化程度、远处转移、淋巴结转移、Ki67表达均呈正相关（P＜0.05），因此，Lin28B的高表达可能与三阴性乳腺癌的发生、发展有关。Sakurai等的研究发现检测26例患者的癌旁乳腺腺体，其中检测到均有Lin28B蛋白，其中的16例患者的癌组织也有Lin28B蛋白表达，并且表达含量明显高于癌旁组织[14]。另外，也有研究表明，在三阴性乳腺癌中Lin28B表达明显上调，且Lin28B的高表达是促进炎症通路的一部分，作用于NF-κB促进其表达，故Lin28B的高表达可能促进细胞由炎症向恶性肿瘤的转变[15]。

综上所述，Lin28B的高表达可能与三阴性乳腺癌的发生、发展紧密相关，有可能会成为三阴性乳腺癌治疗中新的治疗靶点，但是由于研究临床样本太少，还需要大量的临床研究进一步验证。

[1]李索妮，姚煜，南克俊.三阴性乳腺癌治疗进展[J].现代肿瘤医学，2014，22（1）：197-200.

[2]倪晨，李婷，吴振华，等.三阴性乳腺癌化疗进展[J].中国癌症杂志，2014，24（4）：316-320.

[3]周秋锋，岳双磊，吴红梅，等.TNBC原发灶与腋淋巴结转移灶中ER、PR、Her-2的表达变化与预后的相关性[J].实用肿瘤学杂志，2013，27（1）：54-59.

[4]刘红芳，张娟.三阴性乳腺癌临床病理特征和预后影响因素研究[J].河北医学，2012，18（3）：380-382.

[5]姚乐申，张保国，李燕，等.vimentin在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义[J].实用老年医学，2012，26（6）：466-469.

[6]陈洪流.三阴性乳腺癌患者的临床特征及预后因素[J].中国老年学杂志，2013，33（23）：5840-5841.

[7]姚舒洋，徐兵河.三阴性乳腺癌的分子靶向治疗[J].临床药物治疗杂志，2011，9（1）：25-30.

[8]李冰馨，傅深.三阴性乳腺癌放射治疗相关机制的研究进展[J].中国癌症杂志，2014，24（11）：865-870.

[9]管小青，郑向欣，顾书成，等.三阴性乳腺癌组织中Ki67、p53的表达及临床意义[J].现代肿瘤医学，2015，23（6）：786-791.

[10]袁业伟.三阴性乳腺癌最新治疗及研究进展[D].重庆：重庆医科大学，2015.

[11]唐小飞，董志，傅洁民，等.化疗联合分子靶向药物治疗三阴性乳腺癌的研究进展[J].中国药房，2013，24（10）：941-944.

[12]尹一，张频.三阴性乳腺癌的新辅助化疗[J].临床药物治疗杂志，2013，11（3）：33-38.

[13]林志东，叶有强，唐丹，等.三阴性乳腺癌的临床病理特征和预后研究[J].中华全科医学，2013，11（4）：526-527.

[14]Hamano R，Miyata H，Yamasaki M，et al.High expression of Lin28 is associated with tumour aggressiveness and poor prognosis of patients in oesophagus cancer[J].Br J Cacner，2012，106（8）：1415-1423.

[15]Sakurai M，Miki Y，Masuda M，et al.LIN28：a regulator of tumor-suppressing activity of let-7 microRNA in human breast cancer[J].J Steroid Biochem Mol Biol，2012，131（131）：101-106.

Expression and clinical significance of Lin28B in triple-negative breast cancer

SHI Hua-qiuXIE Rui-lian
Department of Oncology,the First Affiliated Hospital of Gannan Medical College in Jiangxi Province,Ganzhou341000,China

[Abstract]ObjectiveTo study the expression of Lin28B in triple-negative breast cancer(TNBC)and its clinical significance.MethodsFrom January 2008 to December 2013,96 patients with TNBC treated in our hospital were selected as observation objects.The expression of Lin28B protein in cancer tissue and para-carcinoma tissue was detected by immunohistochemical method in order to analyze the correlation between Lin28B protein expression and pathological characteristics in patients with TNBC.ResultsThe positivity rate of Lin28B from cancer tissue was 70.8%and in para-carcinoma tissue,its positivity rate was 29.2%,which was displayed statistical difference(P<0.05).There was no relationship between Lin28B protein expression and age,the stage of tumor,and the condition of menstruation of patients(P>0.05).The expression of Lin28B protein was positively correlated with tumor differentiation degree,distal metastasis,lymph node metastasis,Ki67 expression(P<0.05).ConclusionThe expression of Lin28B is related to the occurrence and development of TNBC,and may affect the development of disease and prognosis of patients.

[Key words]Triple negative breast cancer;Lin28B;Clinical significance

[中图分类号]R737.9

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）07（c）-0036-03

（收稿日期：2017-04-21本文编辑：许俊琴）

[基金项目]江西省教育厅科学技术研究项目（150968）