·临床研究·

万　引　徐漫清　张爱妹
江西省胸科医院呼吸二科，南昌　330006

[摘要]　目的探讨大容量肺灌洗术对尘肺患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的影响及意义。方法随机收集我院2014年5月～2015年9月住院行大容量肺灌洗治疗肺尘埃沉着病患者50例及同期我院社区门诊体检健康男性30例，分别检测肺尘埃沉着病患者灌洗前及灌洗后1周外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞表达水平及健康体检男性外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞表达水平，并进行比较分析。结果与健康对照组比较，肺尘埃沉着病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞水平，CD4+/CD8+比值均下降（P＜0.05）；经大容量肺灌洗术后1周CD3+、CD4+T淋巴细胞水平，CD4+/CD8+比值升高（P＜0.05），CD8+T淋巴细胞水平降低（P＜0.05）。结论肺尘埃沉着病患者细胞免疫功能下降，大容量肺灌洗术可使肺尘埃沉着病患者CD3+、CD4+T淋巴细胞水平，CD4+/CD8+比值升高及CD8+T淋巴细胞水平降低，从而提高肺尘埃沉着病患者细胞免疫功能。

[关键词]　肺尘埃沉着病；肺灌洗；T淋巴细胞亚群

肺尘埃沉着病是危害中国工人健康的最严重的职业病。目前，对于肺尘埃沉着病尚无可行的治愈方法，大容量全肺灌洗是目前治疗肺尘埃沉着病的有效方法[1]，其可减轻患者症状、延缓病情进展、提高患者远期生存质量[2]。本文分别定量检测正常健康人群、肺尘埃沉着病患者经大容量肺灌洗前及灌洗后1周外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞表达水平，旨在探讨大容量肺灌洗对肺尘埃沉着病患者T淋巴细胞的影响及意义。

1.1　一般资料

随机收集我院2014年5月～2015年9月住院的肺尘埃沉着病患者50例（经我院或当地职防所诊断，无结核、感染及其他并发症），术前无免疫、内分泌系统等疾患，未接受过免疫治疗及服用过影响免疫功能的药物。患者均为男性，年龄35～59岁，平均（48.4± 4.7）岁；从事粉尘作业史2～25年，平均（14.2±3.9）年。健康对照组来自同期我院社区门诊体检健康男性30例（检测前已征得受检者本人同意，并提供免费检测），年龄31～56岁，平均（47.6±4.5）岁。两组患者年龄、性别比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2　治疗方法

灌洗方法按照大容量肺灌洗术医疗护理常规及操作规程进行[3]。具体方法如下：患者术前给予咪达唑仑2 mg和戊乙奎迷1 mg肌内注射，患者取仰卧位，静脉复合麻醉成功后插入双腔囊支气管导管，分隔双侧肺，检查无漏气，行单肺通气，监测生命体征平稳后开始行肺灌洗，分12次，每次灌入37℃生理盐水1000 ml，分次吸出灌洗液，灌洗液由灰白稍浑浊逐渐变为澄清为止，术中多次给予灌洗侧肺加压通气，并予灌洗侧肺支气管内先后滴入复方异丙托溴铵1.5 ml。结束灌洗后，继续双肺通气，患者意识逐渐恢复，逐渐出现自主呼吸、咳嗽、吞咽反射后拔除双腔支气管导管。

1.3　检测方法

1.3.1　实验仪器　CytoCounter全自动可视化细胞检测仪（上海汇中细胞生物科技有限公司），SEMIBLO玻片干燥仪。

1.3.2　检测前准备①配制磷酸盐缓冲液：将一包磷酸盐缓冲液粉剂（4.0 g）倒入SemiBio®专用缸中，加水至400 ml刻度线，完全溶解后混匀即可。②配制过氧化酶染色液：将一包过氧化酶染色粉（15.1 g）倒入SemiBio®专用缸中，加95%乙醇至500 ml刻度线，充分搅拌≥5 min。③配制复染液：将一包复染粉（0.8 g）倒入SemiBio®专用缸中，再加75%乙醇至500 ml刻度线，充分搅拌至溶解。

1.3.3　检测方法①静脉血标本：吸取20 μl摇匀EDTAK2抗凝全血加于相对应编号的380 μl磷酸盐缓冲液中，即刻混匀。②将湿盒置于水平工作台，加室温水至湿盒底部被完全覆盖。注意湿盒支架处应保持干燥。③取出玻片，将包被面朝上，按序将标签贴于玻片一端，后将玻片置于湿盒支架上（勿使玻片接触到水）。④吸取5 μl稀释血样，滴入玻片方框区域中央。确认无血样流出，且框内无气泡，盖紧盒盖，室温（20～30℃）孵育40 min。⑤孵育40 min后，将玻片按序插入玻片架。⑥将玻片架即刻放入磷酸盐缓冲液中，旋转提拉直至玻片呈无色透明。⑦将玻片架即刻放入过氧化酶染色液中，静置1 min。⑧在步骤“⑦”计时1 min内，将1 ml 2.5%～3.5%过氧化氢溶液加入预先盛有水（至400 ml刻度线）的专用缸中，搅拌均匀后制成新鲜工作溶液。⑨将稍加沥干的玻片架转入新鲜过氧化氢工作溶液中，静置4 min。⑩将玻片架转入75%乙醇（400 ml）专用缸中，旋转提拉至干净，提出后振去多余乙醇。11打开玻片架搭扣，将其置于SemiBio®自动玻片干燥仪下干燥6 min，确保黑框内干燥。12将玻片架放入复染液中，静置1 min。13将玻片架转入纯水（500 ml）专用缸中，静置30 s，其后根据玻片数量不等提拉相应次数，提出后振去多余水分（玻片数＜15片，提拉3次；玻片数≥15片，提拉5次）。14打开玻片架搭扣，将其置于SemiBio®自动玻片干燥仪下吹干（为缩短干燥时间，待玻片黑框内吹干后，可用纸擦干周围水分）。15通过SemiBio®全自动可视化细胞检测仪，现场或异地，随时进行细胞自动计数、分析（若细胞颜色淡而影响软件识别，请重复步骤12～14）。

1.4　观察指标

分别检测正常健康人群、肺尘埃沉着病患者经大容量肺灌洗术前及灌洗术后1周每微升外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞绝对计数及CD4+/CD8+比值。

1.5　统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（）表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

表1　两组T淋巴细胞亚群的比较（个/μl，）

2.1　两组T淋巴细胞亚群的比较

肺尘埃沉着病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞水平，CD4+/CD8+比值均下降（P＜0.05）（表1）。

2.2　肺尘埃沉着病组大容量肺灌洗术前、后T淋巴细胞亚群的比较

与灌洗前比较，灌洗后患者CD3+、CD4+T淋巴细胞、CD4+/CD8+比值升高（P＜0.05），CD8+T淋巴细胞降低（P＜0.05）（表2）。

表2　肺尘埃沉着病组大容量肺灌洗术前、后T淋巴细胞亚群的比较（个/μl，）

肺尘埃沉着病是在职业活动中长期吸入生产性粉尘，以致肺组织弥漫性纤维化为主的全身性疾病。肺尘埃沉着病患者不仅肺功能严重受损[4-5]，亦存在体内免疫功能紊乱[5-10]。T淋巴细胞是人体内主要的免疫功能细胞，主要分为CD4+、CD8+两个亚群，CD4+为辅助性T细胞，调控免疫反应，CD8+为抑制性T细胞，具有免疫抑制作用，CD3+代表T淋巴细胞总数，一般为CD4+和CD8+细胞之和，CD4+/CD8+比值恒定维持细胞免疫反应的平衡，比值降低是机体免疫功能下降的重要标志。普遍研究[6-7，10-11]认为，肺尘埃沉着病患者体内CD3+，CD4+/CD8+低于正常对照组，而对于CD4+、CD8+研究则各有差异。孙曙舫等[10]报告硅沉着病患者CD4+降低，CD8+无明显差异。李艳军等[6]报告硅沉着病患者CD4+、CD8+均下降。冯续有等[7]报告肺尘埃沉着病患者CD4+、CD8+均明显升高。杨琳红等[11]报告肺尘埃沉着病患者CD4+下降，而CD8+明显升高。本例报告中，肺尘埃沉着病组与健康对照组比较，CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均不同程度下降，差异有统计学意义，表明肺尘埃沉着病患者细胞免疫功能下降，机体细胞免疫功能处于“免疫抑制”状态，与李艳军等[6]报告一致。

大容量肺灌洗是目前治疗肺尘埃沉着病的最有效方法，不但可以清除滞留在呼吸道内的粉尘颗粒，还可以去除肺泡及肺间质内的吞尘巨噬细胞及致肺纤维化的炎性细胞因子，从而减少粉尘颗粒对巨噬细胞、淋巴细胞等的破坏作用，细胞免疫功能得到改善[12-13]。本例报告中，肺尘埃沉着病组患者经大容量肺灌洗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+升高，差异有统计学意义，而CD8+则下降，差异有统计学意义，表明肺尘埃沉着病组患者经大容量肺灌洗术后细胞免疫功能有改善，主要表现为CD4+、CD4+/CD8+升高。有研究表明，CD3+与肺弥散量呈正相关[11]，本例肺尘埃沉着病组患者CD3+明显下降（P＜0.05），说明肺尘埃沉着病组患者肺弥散功能亦下降，与临床实际检查结果一致。经大容量肺灌洗术后患者CD3+有明显提升，说明大容量肺灌洗术可以改善患者肺弥散功能，加上患者细胞免疫功能改善，合并细菌、结核等感染风险降低，从而延缓疾病进展，提高生存质量。

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Effect and significance of large volume lung lavage on T lymphocyte subgroup in patients with pneumoconiosis

WAN Yin XU Man-qing ZHANG Ai-mei
The Second Department of Pneumology，Chest Hospital of Jiangxi Province，Nanchang 330006，China

[Abstract]　Objective To explore the effects and significance of large volume lung lavage on CD3+，CD4+and CD8+T lymphocytes in the peripheral blood in patients with pneumoconiosis.Methods 50 patients with pneumoconiosis who were hospitalized in our hospital from May 2014 to September 2015 and given large volume lung lavage were randomly collected.30 healthy males undergone physical examination in the community clinic in our hospital at the same period of time were also collected.The expression level of CD3+，CD4+and CD8+T lymphocytes in the peripheral blood in patients with pneumoconiosis before lung lavage and 1 week after lung lavage was tested.The expression level of CD3+，CD4+and CD8+T lymphocytes in the peripheral blood in healthy males was also tested.Their expression levels were compared and the comparison results were analyzed.Results Compared with the healthy control group，CD3+，CD4+，CD8+T lymphocytes，and CD4+/CD8+ratio in the peripheral blood in patients with pneumoconiosis was reduced respectively (P＜0.05)；After 1 week of large volume lung lavage，CD3+，CD4+T lymphocytes，and CD4+/CD8+ratio was increased respectively(P＜0.05)，and CD8+T was reduced(P＜0.05).Conclusion The cellular immune function in patients with pneumoconiosis is reduced，and large volume lung lavage is able to increase CD3+，CD4+T lymphocytes，and CD4+/CD8+ratio and reduce CD8+T lymphocytes for patients with pneumoconiosis，so as to improve the cellular immune function of patients with pneumoconiosis.

[Key words]　Pneumoconiosis；Lung lavage；T lymphocyte subgroup

[中图分类号]　R135.2　

[文献标识码]　A　

[文章编号]　1674-4721（2016）01（c）-0022-03

[基金项目]　江西省卫生计生委科技计划（20155610）

收稿日期：（2015-10-16　本文编辑：王红双）