高危型人乳头瘤病毒负荷量与宫颈病变的关系研究
刘爱民1 黄淑晖2 姚丽风1 陈益萍1
1.江西省萍乡市妇幼保健院妇产科，江西萍乡 337055；2.江西省妇幼保健院门诊，南昌 330000
［摘要］目的 探讨高危型人乳头瘤（HPV）病毒负荷量与宫颈病变的关系。 方法 选取2013年5月～2014年6月在本院妇科门诊接受高危型HPV病毒负荷量检测的3386例患者作为研究对象，其中阳性感染病例931例。进一步行阴道镜检查、宫颈活检和宫颈管搔刮术并送病理检查，按病毒负荷量分为A组（病毒负荷量1～100 pg/ml）、B组（病毒负荷量101～500 pg/ml）和C组（＞500 pg/ml），观察各组的宫颈病变情况。 结果确诊宫颈病变共446例。CINⅠ～Ⅲ组和宫颈癌组的年龄、病毒负荷量显著大于宫颈炎组，差异有统计学意义（P＜0.01）。宫颈炎构成比随着HPV-DNA病毒负荷量的增加而逐渐下降，差异有统计学意义（P＜0.01）。CINⅠ～Ⅲ构成比随着HPV-DNA病毒负荷量的增加而逐渐升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；不同HPV病毒负荷量组的宫颈癌构成比比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 病毒负荷量与宫颈病变发生关系密切，患者年龄越大，宫颈瘤样病变、癌变发生率越高。
［关键词］高危型人乳头瘤；负荷量；年龄；宫颈病变
目前，关于高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）在女性宫颈病变中的致病机制及其在女性防癌筛查中的重要作用已被广泛认识。宫颈病变包括宫颈炎、宫颈上皮瘤样病变（即癌前病变）及宫颈癌，其中最为严重的是宫颈癌，其是最常见的妇科恶性肿瘤之一。在我国，宫颈癌患病人数和死亡人数均占全世界的1/3［1］。宫颈癌的发生是多种致癌因素长期协同作用的结果，HPV感染是引起宫颈癌的主要生物学因素［2］。随着科学技术水平的发展，人们对导致宫颈癌发生的HPV感染进行了大量研究。本研究通过分析本院妇科门诊就诊患者中宫颈拭子感染高危型HPV的情况，旨在了解高危HPV负荷量与宫颈病变的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2013年5月～2014年6月在本院妇科门诊就诊的有性生活史、要求行宫颈癌筛查的3386例已婚妇女作为研究对象，年龄为22～68岁。所有入选者均行HPV检测，阳性者行阴道镜下宫颈活检和宫颈管搔刮术并送病理检查，按病毒负荷量分为A组（病毒负荷量1～100 pg/ml）、B组（病毒负荷量101～500 pg/ml）和C组（病毒负荷量＞500 pg/ml），观察各组的宫颈患病情况。所有病例均无子宫切除和宫颈手术史、未孕、无盆腔放疗史。
1.2 方法
1.2.1 HPV-DNA定量检测 采用美国 Qiagen Gai thersbury，Inc BML3000基因杂交信号扩大仪及公司提供的专用HPV取样器，插入子宫颈外口，顺时针或逆时针转动5圈，慢慢取出取样器，放入标有受试者信息的、含保存液的试剂瓶中，将收集的脱落细胞在分子水平采用基因杂交-化学发光-信号放大的检测技术进行DNA分解45 min→DNA-RNA杂交60 min→抗体捕获60 min→化学发光检测30 min→计算机判读15 min。
1.2.2 宫颈取材方法 HPV阳性者行阴道镜检查，于镜下先观察上皮及血管，然后涂3%醋酸3 min后观察上皮及血管，在阴道镜图像异常区及碘试验阴性区多点取活检，如为正常转化区，则在转化区3、6、9、12点取活检。
1.3 诊断标准
HPV检测采用二代杂交捕获HC-Ⅱ （核酸杂交检测）方法检测，正常值为0～1.00 pg/ml，高于正常值为阳性［2］。HPV-DNA检测阳性者行阴道镜下多点活检，进行病理组织学检测，组织学诊断标准参考WHO肿瘤分类及诊断标准系列之乳腺及女性生殖器官肿瘤病理学和遗传学［3］，将宫颈病变分为宫颈炎、宫颈上皮内瘤变Ⅰ级（CIN-Ⅰ），宫颈上皮内瘤变Ⅱ级（CIN-Ⅱ）、宫颈上皮内瘤变Ⅲ级（CIN-Ⅲ）和宫颈癌。组织学检测为CIN-Ⅰ及以上病变视为组织学检查阳性。
1.4 统计学处理
采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以.jpg)
±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果
2.1 HPV-DNA及组织病理学检测结果分析
3386例患者中，HPV-DNA阳性病例 931例（27.5%），其中446例行阴道镜检查及宫颈组织活检和宫颈管搔刮术。组织病理学检测显示，宫颈炎287例，宫颈上皮内瘤变Ⅰ～Ⅲ级（CINⅠ～Ⅲ）150例，宫颈癌9例。另外485例失访。
2.2 宫颈病变与年龄、高危型HPV病毒负荷量的关系分析
根据病理检查将宫颈病变分为宫颈炎组、宫颈上皮内瘤变（CINⅠ～Ⅲ）组和宫颈癌组。CINⅠ～Ⅲ组和宫颈癌组的HPV-DNA病毒负荷量显著高于宫颈炎组，年龄显著大于宫颈炎组，差异有统计学意义（P＜0.01）。宫颈癌组的HPV-DNA病毒负荷量与CINⅠ～Ⅲ组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。宫颈癌组的年龄显著大于CINⅠ～Ⅲ组，差异有统计学意义（P＜0.01）（表1）。
表1 宫颈病变与年龄、高危型HPV病毒负荷量的关系分析（.jpg)
±s）
±s）.jpg)
与宫颈炎组比较，*P＜0.01；与CINⅠ-Ⅲ组比较，#P＜0.01
2.3 不同HPV-DNA病毒负荷量与宫颈病变构成情况的关系分析
宫颈炎构成比随着HPV-DNA病毒负荷量的增加而逐渐下降，差异有统计学意义（P＜0.01）。CINⅠ～Ⅲ构成比随着HPV-DNA病毒负荷量的增加而逐渐升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。不同HPV病毒负荷量组的宫颈癌构成比比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。
表2 不同HPV-DNA病毒负荷量与宫颈病变构成情况的关系分析［n（%）］
.jpg)
3 讨论
德国病毒学家Zur Hausen首次提出了女性生殖道HPV感染与宫颈癌的关系，经过多年的研究，目前已经明确HPV感染是宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的主要病因［4］。宫颈癌是常见的妇产科恶性肿瘤，在所有女性恶性肿瘤中，该病的发病率位于第二位［5］，严重威胁妇女的健康。持续高危型HPV感染是女性患宫颈癌以及癌前病变的主要病因［6-7］。有研究显示［8］，HPV感染的检出率在正常人群、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌组中分别为4.0%、30.0%、55.0%、65.0%、99.8%。随着病变程度的加重，HPV检出率也逐渐增高，99%的宫颈癌组织中可检出HPV。刘丽萍等［9］的研究结果显示，较高的HPV病毒负荷量与CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌相关。本研究结果显示，高危型HPV阳性病例931例，阳性率27.5%；宫颈癌组与CINⅠ～Ⅲ组的年龄显著大于宫颈炎组，而HPV-DNA病毒负荷量显著高于宫颈炎组，差异有统计学意义（P＜0.01）。杨赟平等［10］的研究结果显示，重庆地区妇女的HPV感染率为37.3%，其中高危型HPV检出率为27.2%。Agorastos［11-13］等的研究亦显示，年轻组对高危型HPV检测有着高度的敏感性，但特异性较低；而年长组HPV感染率与不同级别的宫颈上皮内瘤变间有明显的相关性，这与本研究结果相似。进一步的阴道镜并组织活检分析显示，CINⅠ～Ⅲ及宫颈癌患者的HPV病毒负荷量高于宫颈炎性病变患者，宫颈炎构成比随HPV病毒负荷量的增加而逐渐降低，CINⅠ～Ⅲ构成比随HPV病毒负荷量的增加而逐渐上升，差异有统计学意义。
根据本研究结果可推测，当负荷量＜100 pg/ml时，由于自身免疫等因素，85%的女性可将病毒清除，故不易导致宫颈肿瘤病变，其病变以炎性为主；当总负荷量＞101 pg/ml时，宫颈上皮瘤样病变明显增加，提示HPV总负荷量的高低与宫颈肿瘤患病率关系密切。
宫颈癌的发生是一个渐进过程，大多数HPV感染女性能依靠自身免疫在8～10个月内清除，但仍有10%～15%的患者持续感染，导致宫颈上皮发生肿瘤病变，进而发生癌变［14］。感染HPV病毒的宫颈上皮虽未发生异型改变，但细胞已出现水肿、核固缩、核破碎或合并细菌、微生物感染等，可导致不同类型的炎性病变［15］，一旦HPV重复感染或持续感染，病毒负荷量累计增加，不易清除时，才会发展成细胞学形态的异常［16］，进一步导致肿瘤病变。
综上所述，持续高危的HPV感染是宫颈炎、癌前病变及宫颈癌的最主要病因，HPV的易感人群为年轻活跃期女性，HPV病毒负荷量的高低、年龄与宫颈病变关系密切，因此，对年轻、负荷量低的女性应随访观察；对病毒负荷值高、年长者，可针对性进行阴道镜及宫颈活组织检查，进行有效的排查，以预防宫颈癌的发生。
［参考文献］
［1］刘晓妮.HPV感染与宫颈癌及癌前病变的关系临床研究［J］.中国社区医师·医学专业，2011.13（1）：13.
［2］杨静，罗军.宫颈病变进展与高危型人乳头瘤病毒负荷量相关性研究［J］.实用预防医学，2010.17（4）：646-648.
［3］乐杰.妇产科学［M］.7版.北京：人民卫生出版社，2008：163.
［4］Petry KU，Menton S，Menton M，et al.Inclusion of HPV testing in routine cervical cancer screening for woman above 29 years in Germany：results for 8466 patients［J］.Br J Cancer，2003，88（10）：1570-1577.
［5］黄佩芬，陈莲芬，甘钊杏.高危型HPV感染与宫颈癌前病变及宫颈癌的相关性研究［J］.中国当代医药，2013，20 （9）：54-55.
［6］Moberg M，Gustavss on I，Gyllensten U.Type-specific associations of human papillomavirus load with risk of developing cervical carcinoma in situ［J］.Int J Cancer，2004，112（5）：854-859.
［7］Lorincz AT，Castle PE，Sherman ME，et al.Viral load of human papillomavirus and risk of CIN3 or cervical cancer［J］. Lancet，2002，360（9328）：228-229.
［8］Agorastos T，Diinas K，Lloveras B，et al.Human papilloma virustesting for primary screening in women at low risk of developing cervical cancer.The Green experience［J］.Gynecol Oncol，2005，96（3）：714-720.
［9］刘丽萍，杨丽华，杨谢兰，等.高危型HPV感染负荷量预测宫颈病变转归可能性的研究［J］.昆明医科大学学报，2012，33（10）：75-77.
［10］杨赟平，杨双双，张莉萍.重庆地区妇女高危型HPV感染现状及年龄的分层分布［J］.重庆医学，2013，42（3）：249-254.
［11］Agorastos T，Chatzigeorgiou K，Brotherton JM，et al.Safety of human papillomavirus （HPV）vaccines：a review of the international experience so far［J］.Vaccine，2009，27 （52）：7270-7281.
［12］Bergeron C，Cas F，Fagnani F，et al.Assessment of human papillomavirus testing on liquid-based cyto-screen system for women with atypical squamous cells of underrmined significance.Effect of age［J］.Gynecol Obstet Fertil，2008，34（4）：312-316.
［13］李琴，蔡建平，陈炳香，等.不同年龄段高风险女性HPV感染率及感染亚型分布状况分析［J］.中国性科学，2015，24（9）：69-71.
［14］张文璎，薛月珍，韩玲，等.高危型人乳头状病毒负荷量与宫颈病变严重程度的关系［J］.上海交通大学学报，2007，11（27）：1354-1357.
［15］李隆玉，乔志强.宫颈癌前病变患者治疗前后HPV病毒负荷量变化的临床研究［J］.中华肿瘤防治杂志，2006，13（4）：298-300.
［16］Walboomers JM，Jaclbs MV，Manos MM，et al.Human papillcmavirus is necessary cause of invasive cervical cancer worldwide［J］.J Pathol，1999，189（1）：12-19.
Relationship research between cervical lesions and high-risk human papilloma virus load
LIU Ai-min1HUANG Shu-hui2YAO Li-feng1CHEN Yi-ping1
1.Department of Obstetrics and Gynecology，Maternal and Child Health Care Hospital of Pingxiang City in Jiangxi Province，Pingxiang 337055，China；2.Department of Outpatient，Maternal and Child Health Care Hospital of Jiangxi Province，Nanchang 330000，China
1.Department of Obstetrics and Gynecology，Maternal and Child Health Care Hospital of Pingxiang City in Jiangxi Province，Pingxiang 337055，China；2.Department of Outpatient，Maternal and Child Health Care Hospital of Jiangxi Province，Nanchang 330000，China
［Abstract］Objective To explore the relationship between high-risk human papilloma virus （HPV）load and cervical lesions.Methods 3386 patients accepted high-risk HPV viral load detection in gynecological outpatient clinic of our hospital from May 2013 to June 2014 were selected as the research group，931 cases were in positive infection，who were detected with colposcopy，cervical biopsy and endocervical scraping，and pathological examinations further.According to viral load，all of them were divided into group A（viral load from 1 to 100 pg/ml），group B（viral load from 101 to 500 pg/ml），and group C （more than 500 pg/ml）.The situation of cervical lesions was observed among each group.Results A total of 446 cases of cervical lesions were diagnosed.Age and viral load in CINⅠ-Ⅲgroup and cervical cancer group was larger than that in the cervicitis group，with significant difference（P＜0.01）.The composition ratio of cervicitis was gradually decreased with the increase of HPV-DNA virus load，with significant difference （P＜0.01）.The composition ratio of CINⅠ-Ⅲ was gradually increased with the increase of HPV-DNA virus load，with significant difference （P＜0.01）. There was no significant difference in the composition ratio of cervical cancer with different HPV virus load group （P＞0.05）.Conclusion The viral load is closely related with cervical lesions.The older patient′s age becomes，the higher the incidences of cervical tumor-like lesion and cancerization are.
［Key words］High-risk human papilloma virus；Load；Age；Cervical lesions
［中图分类号］R711.74［文献标识码］A
［文章编号］1674-4721（2016）04（a）-0123-03
（收稿日期：2015-12-16本文编辑：祁海文）